Inhibidor de rnase (sen glicerol)
O inhibidor da RNase murina é un inhibidor recombinante da RNase murina expresado e purificado a partir de E.coli.Únese á RNase A, B ou C nunha proporción de 1:1 mediante enlaces non covalentes, inhibindo así a actividade dos tres encimas e protexendo o ARN da degradación.Non obstante, non é eficaz contra a RNase 1, a RNase T1, a nuclease S1, a RNase H ou a RNase de Aspergillus.O inhibidor da RNase murina probouse mediante RT-PCR, RT-qPCR e ARNm IVT, e foi compatible con varias transcriptases inversas comerciais, ADN polimerases e ARN polimerases.
En comparación cos inhibidores da RNase humana, o inhibidor da RNase murina non contén dúas cisteínas moi sensibles á oxidación que provoca a inactivación do inhibidor.Iso o fai estable a baixas concentracións de TDT (menos de 1 mM).Esta característica faino axeitado para o seu uso en reaccións nas que altas concentracións de DTT son adversas para a reacción (por exemplo, RT-PCR en tempo real).
Aaplicación
Este produto pódese usar amplamente en calquera experimento onde sexa posible a interferencia da RNase para evitar a degradación do ARN, como:
1.Síntese de ADNc da primeira cadea, RT-PCR, RT-qPCR, etc.;
2. Protexer o ARN da degradación na transcrición/tradución in vitro (por exemplo, a replicación viral in vitro);
3.Inhibición da actividade da RNase durante o illamento e a purificación do ARN.
Condicións de almacenamento
Almacenar a -25~-15℃;
Ciclos de conxelación-descongelación ≤ 5 veces;
Válido por 1 ano.
Definición da unidade
Unha unidade defínese como a cantidade de inhibidor de RNase necesaria para inhibir a actividade de 5 ng de RNase A nun 50%.
Peso molecular
O inhibidor da RNase (sen glicerol) é unha proteína de 50 kDa.
Control de calidade
Exonuclease Actividade:
A incubación de 40 U de enzima con 1 μg de ADN de dixestión de λ-Hind III durante 16 horas a 37 °C provocou unha degradación detectable do ADN tal e como se determinou mediante electroforese en xel.
Actividade das endonucleases:
A incubación de 40 U de enzima con 1 μg λ de ADN durante 16 horas a 37 °C provocou unha degradación detectable do ADN tal e como se determina mediante electroforese en xel.
Nicking Actividade:
A incubación de 40 U de encima con 1 μg de pBR322 durante 16 horas a 37 ℃ deu lugar a unha degradación detectable do ADN tal e como se determina mediante electroforese en xel.
RNase Actividade:
A incubación de 40 U de enzima con 1,6 μg de ARN MS2 durante 4 horas a 37 ℃ deu lugar a unha degradación detectable do ARN tal e como se determina mediante electroforese en xel.
E.ADN coli:
TaqMan qPCR detecta 40 U de encima.O ADN de E.coli é ≤ 0, 1pg/40U.
Notes
1.Non axite nin mexa violentamente para evitar a inactivación dos encimas.
O inhibidor 2.RNase está activo a temperaturas que varían de 25 ℃ a 55 ℃ e inactiva a ≥65 ℃.
3.A actividade da RNase H, da RNase 1 e da RNase T1 non se inhibe.
4.O intervalo de pH para inhibir a actividade da RNase é amplo (activo a pH 5-9), mostrando a máxima actividade a pH 7-8.
