Kit de extracción de ADN/ARN viral
Este kit é axeitado para a extracción rápida de ADN/ARN viral de alta pureza a partir de mostras como hisopos nasofarínxeos, hisopos ambientais, sobrenadantes de cultivos celulares e sobrenadantes de homoxeneado de tecidos.O kit baséase na tecnoloxía de purificación de membrana de sílice que elimina a necesidade de utilizar disolventes orgánicos de fenol/cloroformo ou a precipitación de alcohol que consume moito tempo para extraer ADN/ARN viral de alta calidade.Os ácidos nucleicos obtidos están libres de impurezas e están listos para o seu uso en experimentos posteriores como transcrición inversa, PCR, RT-PCR, PCR en tempo real, secuenciación de próxima xeración (NGS) e Northern blot.
Condicións de almacenamento
Almacenar a 15 ~ 25 ℃ e transportar a temperatura ambiente
Compoñentes
| Compoñentes | 100RXNS |
| Buffer VL | 50 ml |
| Buffer RW | 120 ml |
| DdH2 O libre de RNase | 6 ml |
| Columnas de ARN FastPure | 100 |
| Tubos de recollida (2 ml) | 100 |
| Tubos de recollida sen RNase (1,5 ml) | 100 |
Buffer VL:Proporcionar un ambiente para a lise e a unión.
Buffer RW:Elimina as proteínas residuais e outras impurezas.
DdH2O libre de RNase:Eluir ADN/ARN da membrana da columna de spin.
Columnas de ARN FastPure:Específicamente adsorbe ADN/ARN.
Tubos de recollida 2 ml:Recoller o filtrado.
Tubos de recollida sen RNase 1,5 ml:Recoller ADN/ARN.
Aplicacións
Hisopos nasofarínxeos, hisopos ambientais, sobrenadantes de cultivos celulares e sobrenadantes de homoxeneado de tecidos.
Mater autopreparadoiais
Puntas de pipeta sen RNase, tubos de centrífuga sen RNase de 1,5 ml, centrífuga, mesturador de vórtice e pipetas.
Proceso de experimentación
Realice todos os seguintes pasos nun armario de bioseguridade.
1. Engade 200 μl da mostra a un tubo de centrífuga sen RNase (complementar con PBS ou NaCl ao 0,9% en caso de mostra insuficiente), engadir 500 μl de Buffer VL, mesturar ben agitando con vórtex durante 15 – 30 segundos e centrifugar. brevemente para recoller a mestura no fondo do tubo.
2. Coloque as columnas de ARN FastPure nun tubos de recollida de 2 ml.Transferir a mestura do paso 1 ás columnas de ARN FastPure, centrifugar a 12.000 rpm (13.400 × g) durante 1 min e descartar o filtrado.
3. Engade 600 μl de tampón RW ás columnas de ARN FastPure, centrifugue a 12.000 rpm (13.400 × g) durante 30 segundos e descarte o filtrado.
4. Repita o paso 3.
5. Centrifuga a columna baleira a 12.000 rpm (13.400 × g) durante 2 min.
6. Transfire coidadosamente as columnas de ARN FastPure a un novo tubo de recollida sen RNase de 1,5 ml (proporcionado no kit) e engada 30 – 50 μl de ddH2O sen RNase ao centro da membrana sen tocar a columna.Deixar repousar a temperatura ambiente durante 1 min e centrifugar a 12.000 rpm (13.400 × g) durante 1 min.
7. Descarta as columnas de ARN FastPure.O ADN/ARN pódese usar directamente para ensaios posteriores ou almacenarse a -30 ~ -15 °C durante un período curto ou entre -85 ~ -65 °C durante un período máis longo.
Notas
Só para uso de investigación.Non para o seu uso en procedementos de diagnóstico.
1. Equilibre as mostras a temperatura ambiente con antelación.
2. Os virus son altamente infecciosos.Asegúrate de tomar todas as precaucións de seguridade necesarias antes do experimento.
3. Evite a conxelación e desconxelación repetidas da mostra, xa que isto pode provocar a degradación ou a redución do rendemento do ADN/ARN viral extraído.
4. Os equipos de preparación propia inclúen puntas de pipeta sen RNase, tubos de centrífuga sen RNase de 1,5 ml, centrífuga, mesturador de vórtice e pipetas.
5. Cando use o kit, use unha bata de laboratorio, luvas de látex desbotables e unha máscara desbotable e use consumibles sen RNase para minimizar o risco de contaminación por RNase.
6. Realice todos os pasos a temperatura ambiente a non ser que se especifique o contrario.
Mecanismo e fluxo de traballo
