Sensible á temperatura UNG

UNG Sensible á Temperatura (TS-UNG) é obtido por expresión recombinante en E. coli.O encima cataliza a liberación de uracilo libre do ADN monocatenario e bicatenario que contén uracilo e é inactivo contra o ARN.En comparación co encima UNG convencional de orixe xenética de E. coli, o encima TS-UNG ten maior actividade a baixas temperaturas (20 ℃ ~ 37 ℃) e é sensible á temperatura e facilmente inactiva (50 ℃), evitando a degradación da amplificación que contén dUTP. produtos a temperatura ambiente pola actividade residual que pode permanecer despois da inactivación do encima UNG convencional.Polo tanto, o encima TS-UNG non só é axeitado para a reacción de prevención da contaminación por PCR, senón que tamén coincide ben co programa de amplificación RT-PCR e pódese usar na reacción de prevención da contaminación por RT-PCR.

Aplicación recomendada

Amplificación da prevención da contaminación

Condición de almacenamento

-20 °C para almacenamento a longo prazo, debe mesturarse ben antes do seu uso, evitando conxelación e desconxelación frecuentes.

Buffer de almacenamento

Tris-HCl 20 mM (pH 7,5), NaCl 100 mM, EDTA 0,1 mM, DTT 1 mM, estabilizador, glicerol ao 50 %.

Definición da unidade

A cantidade de encima necesaria para degradar 1 µg de ADN monocatenario que contén bases dU en 1 hora a 37 °C é de 1 unidade de actividade (U).

Control de calidade

1.Pureza electroforética SDS-PAGE superior ao 98%

2.Actividade de degradación, control de lote a lote, estabilidade

3.Sen actividade nuclease esóxena, ningunha endonuclease esóxena ou contaminación por exonuclease.

Instrucións

Nota: a: Se se usa para qPCR/qRT-PCR, a sonda fluorescente debe engadirse ao sistema de reacción.Normalmente, unha concentración final de cebador de 0,2 μM pode dar bos resultados;cando o rendemento da reacción é pobre, a concentración do cebador pódese axustar no intervalo de 0,2-1 μM.Normalmente, a concentración da sonda está optimizada no intervalo de 0,1-0,3 μM.Pódense realizar experimentos de gradiente de concentración para atopar a mellor combinación de cebador e sonda.

Notas

1.A temperatura de reacción óptima do encima TS-UNG é relativamente baixa e pódese optimizar no intervalo de 20 ℃ ~ 37 ℃, a dosificación do encima e o tempo de reacción pódense optimizar no intervalo de 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 min;e o encima pódese inactivar no proceso de transcrición inversa.

2.É adecuado para PCR e RT-PCR para evitar a contaminación.

3.Evite a conxelación-desconxelación frecuente e non expoña a grandes flutuacións de temperatura.

4.Os diferentes xenes a amplificar teñen unha eficiencia de utilización diferente do dUTP e a sensibilidade ao encima UNG, polo tanto, se o uso do sistema UNG conduce a unha diminución da sensibilidade de detección, o sistema de reacción debe axustarse e optimizarse; se precisa asistencia técnica, póñase en contacto nosa empresa.