Rnase A
A ribonuclease A (RNaseA) é un polipéptido monocatenario que contén 4 enlaces disulfuro cun peso molecular duns 13,7 kDa.A RNase A é unha endoribonuclease que degrada especificamente o ARN monocatenario nos residuos C e U.En concreto, a escisión recoñece o enlace fosfodiéster formado pola 5'-ribosa dun nucleótido e o grupo fosfato na 3'-ribosa do nucleótido de pirimidina adxacente, polo que os 2,3'-fosfatos cíclicos hidrolízanse ata os 3' correspondentes. nucleósidos fosfatos (por exemplo, pG-pG-pC-pA-pG é escindida pola RNase A para xerar pG-pG-pCp e A-PG).A RNase A é a máis activa na escisión de ARN monocatenario.A concentración de traballo recomendada é de 1-100 μ G/mL, compatible con varios sistemas de reacción.A baixa concentración de sal (NaCl 0-100 mM) pode usarse para cortar ARN monocatenario, ARN bicatenario e cadeas de ARN formadas pola hibridación ARN-ADN.
Non obstante, a alta concentración de sal (≥0,3 M), a RNase A só escinde especificamente o ARN monocatenario.
A RNase A úsase máis habitualmente para eliminar o ARN durante a preparación de ADN plasmídico ou ADN xenómico.Se a DNase está activa ou non durante o proceso de preparación pode afectar facilmente a reacción.O método tradicional de ferver nun baño de auga pódese usar para inactivar a actividade da DNase.Este produto non contén DNase e protease e non require tratamento térmico antes do seu uso.Ademais, este produto tamén se pode usar en experimentos de bioloxía molecular, como análise de protección da RNase e análise de secuencias de ARN.
Condicións de almacenamento
O produto debe almacenarse a -25 ℃ ~ - 15 ℃ durante 2 anos.
Especificacións
| Aparición | Po |
| Cantidade | 100 mg / 1 g |
| Tipo de produto | RNase A |
Instrucións
Este é un dos métodos comúns para preparar a solución de almacenamento de RNase A.Tamén se pode prepararpor outros métodos segundo os métodos tradicionais do laboratorio ou da literatura de referencia (comodisolución directa en solución 10 mM de Tris-HCl, pH 7,5 o Tris-NaCl)
1. Use acetato de sodio 10 mM (pH 5,2) para preparar 10 mg/mL de solución de almacenamento de RNase A.
2. Quentando a 100 ℃ durante 15 min.
3. Arrefriar a temperatura ambiente, engadir 1/10 de volume de Tris-HCl 1 M (pH 7,4), axustar o seu pH a 7,4 (paraexemplo, engade 500 mL de solución de almacenamento de RNase 10 mg/mL Tris-HCl 1 M, pH 7,4).
4. Subembalado a -20 ℃ para almacenamento conxelado, que pode ser estable ata 2 anos.
[Notas]:
Ao ferver a solución de RNaseA en condicións neutras, formarase precipitación de RNase;Ferva a un pH máis baixo, e se hai precipitación pódese observar, que pode ser provocada pola presenza de impurezas proteicas.Se se atopa sedimento despois da ebulición, as impurezas pódense eliminar mediante centrifugación a alta velocidade (13.000 rpm) e, a continuación, subenvasarse para almacenar a conxelación.
Notas
Use o EPI necesario, como bata de laboratorio e luvas, para garantir a súa saúde e seguridade.
