DNase I (Libre de Rnases) (5u/ul)
Número de Cat: HC4007A
A DNase I (desoxirribonuclease I) é unha endodesoxirribonuclease que pode dixerir ADN monocatenario ou bicatenario.Recoñece e escinde enlaces fosfodiéster para producir monodesoxinucleótidos ou oligodesoxinucleótidos monocatenarios ou bicatenarios con grupos fosfato no 5'-terminal e hidroxilo no 3'-terminal.A actividade da DNase I depende do Ca2+e pode ser activado por ións metálicos divalentes como o Mn2+e Zn2+.5 mM de Ca2+protexe a enzima da hidrólise.En presenza de Mg2+, o encima podería recoñecer e escindir aleatoriamente calquera sitio en calquera febra de ADN.En presenza de Mn2+, as dobres cadeas de ADN pódense recoñecer e cortar simultáneamente en case o mesmo sitio para formar fragmentos de ADN de extremo plano ou fragmentos de ADN de extremo pegajoso con 1-2 nucleótidos que sobresaen.
Compoñentes
| Nome | 0,1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, libre de RNase | 20 μl | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| 10 × ADNase I tampón | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Condicións de almacenamento
-25 ℃ ~ -15 ℃ para almacenamento;Transporte baixo bolsas de xeo.
Instrucións
1. Prepare a solución de reacción no tubo sen RNase segundo as proporcións que se indican a continuación:
| Compoñente | Volume |
| ARN | X µg |
| 10 × DNase I tampón | 1 μl |
| ADNase I, libre de RNase (5U/μL) | 1 U por µg de ARN① |
| ddH2O | Ata 10 μL |
Nota: ①Calcula o volume de DNase I que hai que engadir en función da cantidade de ARN.
2. 37 ℃ durante 15 minutos;
3. Engade 0,5 M de EDTA á concentración final de 2,5 mM ~ 5 mM e quenta a 65 ℃ durante 10 minutos para deter a reacción.A mostra pódese usar directamente para a seguinte reacción, como a transcrición inversaexperimento.
Definición da unidade
Unha unidade defínese como a cantidade de encima que degradará completamente 1 µg de pBR322ADN en 10 minutos a 37 ℃.
Control de calidade
RNase:5U de DNase I con 1,6 µg de ARN MS2 durante 4 horas a 37 ℃ non produce degradación xa quedeterminado por electroforese en xel de agarosa.
Notas
1. Prepara 0.5MEDTA por ti mesmo.
2. Use 1U DNase I por µg de ARN.Non obstante, se o ARN é inferior a 1 µg, use 1U DNase I.
3. Coloque o encima no xeo durante a operación.
