One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Número de Cat: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix é para a cuantificación de fluorescencia baseada no colorante SYBR Green I.Usando cebadores específicos de xenes, as reaccións de transcrición inversa e qPCR complétanse nun só tubo, eliminando a necesidade de operacións repetidas de apertura de tapa e pipeteo, mellorando moito a eficiencia do ensaio e reducindo o risco de contaminación.Para as mostras de ARN, o kit emprega a transcriptase inversa resistente á calor para unha síntese eficiente de cDNA e HotStart Taq DNA Polymerase para a amplificación cuantitativa.Baixo o sistema de tampón optimizado, a sensibilidade do kit pode chegar a ser de 0,1 pg para obxectivos altamente expresados e de ata 1 pg para obxectivos de expresión moderada.O kit é axeitado para a amplificación e cuantificación de mostras de ADN.Permite a detección e cuantificación sensible de ácidos nucleicos de diferentes mostras vexetais e animais, células e microorganismos.
Compoñentes
| No | Nome | Volume | Volume |
| 1 | Buffer avanzado | 250 μl | 2 × 1,25 ml |
| 2 | Mestura enzimática avanzada | 20 μl | 200 μl |
| 3 | Libre de RNase H2O | 250 μl | 2 × 1,25 ml |
Condicións de almacenamento
Este produto debe almacenarse a -25 ~ -15 ℃ lonxe da luz durante 1 ano.
Instrucións
1.Configuración do sistema de reacciónd
| Compoñentes | Volume (μl) | Volume (μl) | Concentración final |
| Buffer avanzado | 12.5 | 25 | 1× |
| Mestura enzimática avanzada | 1 | 2 | - |
| Cebador directo (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Cebador inverso (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Plantilla de ARNb | X | X | - |
| Libre de RNase H2Oc | ata 25 | ata 50 | - |
Notas:
1) a.TA concentración final do cebador foi de 0,2 μmol/L, que tamén se pode axustar entre 0,1 e 1 μmol/L segundo corresponda.
2) b.O reactivo é extremadamente sensible, cun ARN total no intervalo de 1pg-1μg, e as probas de mostras humanas mostraron unha entrada óptima de 1 pg-100 ng, controlando un valor global de Ct no intervalo de 15-30 segundo corresponda.
3) c.Recoméndase usar 20μL ou 50μL para garantir a validez e reproducibilidade da amplificación do xene diana.
4) d.Prepárese no banco ultralimpo e use puntas e tubos de reacción sen residuos de nuclease;recoméndase as puntas con cartuchos de filtro.Evitar a contaminación cruzada e a contaminación por aerosois.
2.Programa de reacción
| Paso de ciclo | Temp. | Tempo | Ciclos |
| Transcrición inversa | 50℃a | 6 min | 1 |
| Desnaturalización inicial | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Reacción de amplificación | 95 ℃ | 15 seg | 40 |
| 60℃b | 30 seg | ||
| Etapa da curva de fusión | Valores predeterminados do instrumento | 1 | |
Notas:
1) a.A temperatura de transcrición inversa pódese seleccionar entre 50-55 °C segundo as necesidades experimentais.Para as mostras de ADN, pódese omitir o proceso de transcrición inversa.
2) b.En casos especiais a temperatura de recocido/extensión pódese axustar segundo o valor Tm de imprimación, recoméndase 60°C.
Notas
1. Este produto é só para uso de investigación.
2. Por favor, opere con batas de laboratorio e luvas desbotables, para a súa seguridade.
