Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Número de Cat: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) é un kit de PCR cuantitativa multiplex baseado en ARN como molde.No proceso do experimento realizouse a transcrición inversa e a PCR cuantitativa nun mesmo tubo, o que simplificou a operación experimental e reduciu o risco de contaminación.Neste kit, a primeira cadea de ADNc foi sintetizada de forma eficiente mediante a transcriptase inversa resistente á calor e amplificada cuantitativamente pola ADN polimerase HotStart Tag.O kit contén principalmente tampón MP optimizado, mestura de encimas, etc. A solución tampón xa contén Mg2+e dNTP.Ademais, engádense os factores que poden inhibir eficazmente a amplificación da PCR inespecífica e mellorar a eficiencia de amplificación de varias reaccións qPCR, o que pode garantir a eficiencia da amplificación e levar a cabo unha reacción de amplificación múltiple.Engadiuse o sistema dUTP/UDG para previr eficazmente o risco de contaminación por aerosol.
Compoñentes
1. Tampón
2. Mestura enzimática
Especificación
| Inicio quente | Arranque en quente incorporado |
| Método de detección | Detección de sonda cebadora |
| Método PCR | RT-qPCR dun paso |
| Polimerase | ADN polimerase Taq |
| Tipo de mostra | ADN |
Condicións de almacenamento
O produto envíase con xeo seco e pódese almacenar a -25 ~ -15 ℃ durante 1 ano.Debe evitar a frecuenciaconxelar-desconxelar.Recoméndase gardar por separado.
Instrucións
1.Reacción Sistema
| Compoñentes | Volume (μl) | Concentración final |
| 2 × MP Buffer | 12.5 | 1× |
| Mestura enzimática | 1 | - |
| Mestura cebador/sonda (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Modelo RNA | 1-10 | - |
| H2O libre de RNase | ata 25 | - |
Notas:
Asegúrese de mesturar ben antes do uso, evitando burbullas excesivas causadas por vibracións violentas.
a.Concentración de imprimación: mestura de imprimación incluíndo imprimación multiplex, segundo a situación a concentración de imprimación óptima pode estar entre 0.l e 1.0μM.
b.Concentración da sonda: mestura de sondas que inclúe o grupo fluorescente da diferenza de etiquetado da sonda múltiple, dependendo da situación, a concentración óptima da sonda pode estar entre 0,05 e 0,5 μM.
c.Dilución do modelo: a qPCR é moi sensible e recoméndase diluír o modelo.O valor Ct de control é adecuado entre 20 e 35.
d.Preparación do sistema: prepárese na mesa de traballo ultra limpa, e pipeta e tubo de reacción sen residuos de nuclease;recoméndase utilizar a cabeza da pistola con elemento filtrante.Evitar a contaminación cruzada e a contaminación por aerosois.
2. Ciclismo optimizadoProtocolo
| Ciclo paso | Temp. | Tempo | Ciclos |
| Transcrición inversa | 50℃a | 20 minutos | 1 |
| Inicial-desnaturalización | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Reacción de amplificación | 95 ℃ | 15 seg |
40-45 |
| 60℃ b | 30 seg c |
Notas:
a.Transcrición inversa: a temperatura pode seleccionar 42 °C ou 50 °C.
b.Reacción de amplificación: a temperatura axústase segundo o valor de Tm dos cebadores deseñados.
c.Adquisición de sinal de fluorescencia: configure o procedemento experimental segundo os requisitos do manual do instrumento.
Notas
Use o EPI necesario, como bata de laboratorio e luvas, para garantir a súa saúde e seguridade.
