Hotstart Taq DNA polimerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (modificación de anticorpos) é unha ADN polimerase termoestable de inicio en quente de Thermus aquaticus YT-1, que posúe unha actividade de polimerase 5′→3′ e unha actividade de endonuclease flap de 5′.A ADN polimerase Taq de inicio en quente é unha ADN polimerase Taq modificada por anticorpos Taq termolábiles.A modificación de anticorpos aumentou a especificidade, a sensibilidade e o rendemento da PCR.
Compoñentes
| Compoñente | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5 × HC Taq Buffer | 4 × 1 ml | 4 × 10 ml | 4 × 50 ml | 5 × 400 ml |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (anticuerpo modificado) (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 10 × 5 ml |
Aplicacións
Tris-HCl 10 mM (pH 7,4 a 25 ℃), KCl 100 mM, EDTA 0,1 mM, ditiotreitol 1 mM, Tween20 0,5%, IGEPALCA-630 0,5% e glicerol ao 50%.
Condición de almacenamento
Transporte a menos de 0 °C e almacénase a -25 °C ~ -15 °C.
Definición da unidade
Unha unidade defínese como a cantidade de encima que incorpora 15 nmol de dNTP a un material insoluble en ácido en 30 minutos a 75 °C.
Control de calidade
1.EndActividade onuclease:A incubación de 20 U de encima con 4 μg de ADN pUC19 durante 4 horas a 37 ℃ deu lugar a unha degradación detectable do ADN tal e como se determina mediante electroforese en xel.
2.PCR Lambda de 5 kb:25 ciclos de amplificación por PCR de 5 ng de ADN Lambda con 1,25 unidades de Taq ADN polimerase en presenza de 200 µM de dNTPs e 0,2 µM de cebadores dan como resultado o produto esperado de 5 kb.
3.Actividade exonuclease:A incubación dunha reacción de 50 µl que conteña un mínimo de 12,5 U de Taq ADN polimerase con 10 nmol de oligonucleótido 5´-FAM durante 30 minutos a 37 ℃ non produce degradación detectable.
4.Actividade RNase:A incubación dunha reacción de 10 µL que contén 20 U de encima con 1 µg de transcritos de ARN durante 2 horas a 37 °C provocou unha degradación detectable do ARN, segundo se determina mediante electroforese en xel.
5.Inactivación térmica:Non.
Sistema de reacción
| Compoñentes | Volume |
| ADN modeloa | opcional |
| Cebador directo de 10 μM | 0,5 μl |
| Cebador inverso de 10 μM | 0,5 μl |
| dNTP Mix (10 mM cada un) | 0,5 μl |
| 5 × HC Taq Buffer | 5 μl |
| Taq ADN polimeraseb(5U/μL) | 0,125 μl |
| Auga sen nucleasas | Ata 25 μL |
Notas:
1) a.
| ADN | Cantidade |
| Xenómico | 1 ng-1 μg |
| Viral ou plásmido | 1 páxina-1 ng |
2) b.A concentración óptima de Taq DNA Polymerase pode variar entre 5 e 50 unidades/ml (0,1-0,5 unidades/25 µL de reacción) en aplicacións especializadas.
Protocolo de ciclo térmico
PCR
| Paso | Temperatura(°C) | Tempo | Ciclos |
| Desnaturalización iniciala | 95 ℃ | 1-3 min | - |
| Desnaturalización | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Ciclos |
| Recocidob | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Extensión | 68 ℃ | 1 kb/min | |
| Ampliación Final | 68 ℃ | 5 min | - |
Notas:
1) Unha desnaturalización inicial de 1 min a 95 °C é suficiente para a maioría das amplificacións.Para modelos difíciles, recoméndase unha desnaturalización máis longa de 2-3 minutos a 95 °C.Con PCR de colonias, recoméndase unha desnaturalización inicial de 5 minutos a 95 °C.
2) O paso de recocido é normalmente de 15-60 s.A temperatura de recocido baséase na Tm do par de cebadores e normalmente é de 45-68 ℃.
