ADN polimerase Wild Taq
A ADN polimerase Taq é unha ADN polimerase termoestable de Thermus aquaticus YT-1, que posúe unha actividade polimerase 5′→3′ e unha actividade de endonuclease flap de 5′.
Compoñentes
| Compoñente | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Taq Buffer | 2 × 1 ml | 2 × 10 ml | 2 × 50 ml | 5 × 200 ml |
| ADN polimerase Taq (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5 × 10 ml |
Condición de almacenamento
Transporte a menos de 0 °C e almacénase a -25 °C ~ -15 °C.
Definición da unidade
Unha unidade defínese como a cantidade de encima que incorpora 15 nmol de dNTP a un material insoluble en ácido en 30 minutos a 75 °C.
Control de calidade
1.Ensaio de pureza de proteínas (SDS-PAGE):A pureza da ADN polimerase Taq foi ≥95% determinada pola análise SDS-PAGE.
2.EndActividade onuclease:Un mínimo de 5 U de Taq ADN polimerase con 1 μg de λDNA durante 16 horas a 37 ℃ non produce degradación detectable segundo se determina.
3.Actividade exonuclease:Un mínimo de 5 U de ADN polimerase Taq con 1 μg de ADN de dixestión de λ -Hind Ⅲ durante 16 horas a 37 ℃ non produce degradación detectable segundo se determina.
4.Actividade Nickase:Un mínimo de 5 U de ADN polimerase Taq con 1 μg de ADN pBR322 durante 16 horas a 37 °C non produce degradación detectable segundo se determina.
5.Actividade RNase:Un mínimo de 5 U de ADN polimerase Taq con 1,6 μg de ARN MS2 durante 16 horas a 37 °C non produce degradación detectable segundo se determina.
6.E. coliADN:5 U de ADN polimerase Taq son cribados para detectar a presenza de ADN xenómico de E. coli utilizando TaqMan qPCR con cebadores específicos para o locus do ARNr 16S de E. coli.A contaminación do ADN xenómico de E. coli é ≤1 copia.
7.Amplificación por PCR (ADN Lambda de 5,0 kb)- Unha reacción de 50 µL que contén 5 ng de ADN Lambda con 5 unidades de ADN polimerase Taq durante 25 ciclos de amplificación por PCR dá como resultado o produto esperado de 5,0 kb.
Configuración de reacción
| Compoñentes | Volume |
| ADN modeloa | opcional |
| Cebador directo de 10 μM | 1 μl |
| Cebador inverso de 10 μM | 1 μl |
| dNTP Mix (10 mM cada un) | 1 μl |
| 10 × Taq Buffer | 5 μl |
| Taq ADN polimeraseb | 0,25 μl |
| Auga sen nucleasas | Ata 50 μL |
Notas:
1) A concentración de reacción óptima de diferentes moldes é diferente.A seguinte táboa mostra o uso recomendado do modelo de sistema de reacción de 50 µl.
| ADN | Cantidade |
| Xenómico | 1 ng-1 μg |
| Viral ou plásmido | 1 páxina-1 ng |
2) A concentración óptima de Taq ADN polimerase pode variar entre 0,25 µl e 1 µl en aplicacións especializadas.
ReacciónPrograma
| Paso | Temperatura(°C) | Tempo | Ciclos |
| Desnaturalización iniciala | 95 ℃ | 5 min | - |
| Desnaturalización | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Ciclos |
| Recocidob | 60 ℃ | 15 s | |
| Extensión | 72 ℃ | 1 kb/min | |
| Ampliación Final | 72 ℃ | 5 min | - |
Notas:
1) A condición de desnaturalización inicial é adecuada para a maioría das reaccións de amplificación e pódese modificar segundo a complexidade da estrutura do molde.Se a estrutura do molde é complexa, o tempo de pre-desnaturalización pódese ampliar a 5-10 minutos para mellorar o efecto de desnaturalización inicial.
2) A temperatura de recocido debe axustarse segundo o valor de Tm do cebador, que xeralmente se establece en 3~5 ℃ inferior ao valor de Tm do cebador;Para modelos complexos, é necesario axustar a temperatura de recocido e estender o tempo de extensión para conseguir unha amplificación eficiente.
