BspQI
BspQI pódese expresar recombinantemente en E. coli que poden recoñecer sitios específicos e prodúcense baixo
BspQI, unha endonuclease de restrición de endonuclease IIs, deriva dunha cepa recombinante de E. coli que leva o xen BspQI clonado e modificado de Bacillus sphaericus.Pode recoñecer sitios específicos, e a secuencia de recoñecemento e os sitios de escisión son os seguintes:
5' · · · ·GCCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Características do produto
1. Alta actividade, dixestión rápida;
2. Baixa actividade estrela, garantindo un corte preciso como o "bisturí";
3. Sen BSA e libre de orixe animal;
Sensibilidade á metilación
Dmetilación:Non sensible;
Dmetilación cm:Non sensible;
Metilación CpG:Non sensible;
Condicións de almacenamento
O produto debe enviarse ≤ 0℃;Almacenar a -25 ~ - 15 ℃.
Buffer de almacenamento
Tris-HCl 20 mM, EDTA 0,1 mM, KCl 500 mM, ditiotreitol 1,0 mM, albúmina recombinante 500 µg/ml, Trition X-100 ao 0,1 % e glicerol ao 50 % (pH 7,0 a 25 °C).
Definición da unidade
Unha unidade defínese como a cantidade de encima necesaria para dixerir 1 µg de ADN de control interno en 1 hora a 50 °C nun volume de reacción total de 50 µL.
Control de calidade
Ensaio de pureza de proteínas (SDS-PAGE):A pureza de BspQI foi ≥95% determinada pola análise SDS-PAGE.
RNase:10U de BspQI con 1,6 μg de ARN MS2 durante 4 horas a 50 ℃ non producen degradación como se determina pola electroforese en xel de agarosa.
Actividade non específica da DNase:10U de BspQI con 1 μg de ADN λ a 50 ℃ durante 16 horas, en comparación con 50 ℃ durante 1 hora, non producen exceso de ADN segundo o determinado pola electroforese en xel de agarosa.
Ligadura e corte:Despois da dixestión de 1 μg de λDNA con 10U BspQI, os fragmentos de ADN pódense ligar con ADN ligase T4 a 16ºC.E estes fragmentos ligados pódense recortar con BspQI.
E. coli ADN: A detección de qPCR de TaqMan específico do ADNr de E. coli 16s mostrou que o residuo do xenoma de E.coli ≤ 0,1 pg/ul.
Residuo de proteína hóspede:≤ 50 ppm
Bacteriano Endotoxina: Proba LAL, segundo a edición 2020 da Farmacopea chinesa IV, método de proba de límite de xel, regra xeral (1143).O contido de endotoxinas bacterianas debe ser ≤10 EU/mg.
Sistema de reacción e condicións
| Compoñente | Volume |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μl |
| ADN | 1 μg |
| 10 x BspQ I Buffer | 5 μl |
| dd H2O | Ata 50 μL |
Condicións de reacción: 50 ℃, 1~16 h.
Inactivación térmica: 80 °C durante 20 min.
O sistema de reacción e as condicións recomendados poden proporcionar un efecto de dixestión enzimática relativamente bo, que é só para referencia, consulte os resultados experimentais para obter máis detalles.
Aplicación do produto
Dixestión de endonuclease de restrición, Clonación rápida.
Notas
1. O volume do encima ≤ 1/10 do volume de reacción.
2. A actividade das estrelas pode ocorrer cando a concentración de glicerol é superior ao 5%.
3. A actividade de escisión pode ocorrer cando o substrato está por debaixo da proporción recomendada.
