2×HiF Taq máis Master Mix
Número de Cat: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (With Dye) é unha solución 2×premesturada lista para usar que contén ADN polimerase Plus HIF, dNTPs e tampón optimizado.Dous anticorpos monoclonais a temperatura ambiente que inhiben a actividade da polimerase e a actividade 3′→5′exonuclease engádense á mestura principal para unha PCR de inicio en quente fácil e altamente específica.O factor de extensión engádese á mestura mestra para darlle ao encima unha capacidade de amplificación de fragmentos longos, a lonxitude da amplificación pode ser de ata 13 kb, o encima ten unha actividade de ADN polimerase 5′→3′ e unha actividade de 3′→5′. actividade exonuclease, a súa fidelidade é 83 veces a da ADN polimerase Taq, que é 9 veces a da ADN polimerase ordinaria.É axeitado para a amplificación de modelos complexos, o produto de amplificación é un extremo romo.
2×HIF Taq plus Master Mix (con colorante) ten as vantaxes de ser rápido e sinxelo, alta sensibilidade, forte especificidade, boa estabilidade, etc., o sistema de reacción só precisa engadir cebadores e modelos e pode ser amplificado por dous protocolo de pasos, simplificando os pasos experimentais e aforrando tempo.Este produto contén colorantes indicadores de electroforese e os produtos de PCR pódense usar directamente para a electroforese.Ademais, o produto tamén contén un axente protector específico, polo que a mestura principal pode manter unha actividade estable despois de conxelar-desconxelar repetidamente.
Condicións de almacenamento
Os produtos deben almacenarse a -25 ~ -15 ℃ durante 1 ano.
Especificacións
Especificación do produto | Master Mix |
Concentración | 2× |
Inicio quente | Inicio en quente incorporado |
Saínte | Romo |
Velocidade de reacción | Rápido |
Tamaño (produto final) | Ata 13 kb |
Condicións para o transporte | Xeo seco |
Tipo de produto | Premesturas de PCR de alta fidelidade |
Instrucións
1.Sistema de reacción PCR
Compoñentes | Volume (μl) |
Modelo de ADN | Axeitado |
Cebador directo (10 μmol/L) | 2.5 |
Cebador inverso (10 μmol/L) | 2.5 |
2×HIF Taq máis Master Mix | 25 |
ddH2O | ata 50 |
2.Uso recomendado de diferentes modelos
Tipo de modelo | Amplificar fragmentos de 1 kb a 10 kb |
ADN xenómico | 50 ng-200 ng |
ADN plasmídico ou viral | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-2,5 µL (non exceda o 10 % do volume de reacción final da PCR) |
3.Protocolo de amplificación
1) Protocolo de dous pasos (modelo de complexidade)
Paso de ciclo | Temp. | Tempo | Ciclos |
Desnaturalización inicial | 98 ℃ | 3 min | 1 |
Desnaturalización | 98 ℃ | 10 seg | 30-35 |
Extensión | 68 ℃ | 30 seg/kb | |
Ampliación final | 72 ℃ | 5 min | 1 |
2) Protocolo de tres pasos (protocolo regular)
Paso de ciclo | Temp. | Tempo | Ciclos |
Desnaturalización inicial | 98 ℃ | 3 min | 1 |
Desnaturalización | 98 ℃ | 10 seg | 30-35 |
Recocido | 60℃ | 20 seg | |
Extensión | 72 ℃ | 30 seg/kb | |
Ampliación final | 72 ℃ | 5 min | 1 |
3) Protocolo de gradiente de recocido (modelo de complexidade)
Paso de ciclo | Temperatura | Tempo | Ciclos |
Desnaturalización inicial | 98 ℃ | 3 min | 1 |
Desnaturalización | 98 ℃ | 10 seg | 15 (1℃ redución por ciclo) |
Recocido gradiente | 70-55 ℃ | 20 seg | |
Extensión | 72 ℃ | 30 seg/kb | |
Desnaturalización | 98 ℃ | 10 seg |
20 |
Recocido | 55 ℃ | 20 seg | |
Extensión | 72 ℃ | 30 seg/kb | |
Ampliación final | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Funcións baixo diferentes protocolos de amplificación
Protocol | Dous pasos | Tres pasos | Recocido gradiente |
Espec. | rápido | medio | lento |
Especificidade | alto | medio | alto |
Rendemento da PCR | medio | alto | medio |
Taxa de detección | alto | medio | alto |
Notas
Use o EPI necesario, como bata de laboratorio e luvas, para garantir a súa saúde e seguridade.