Warm Start Bst 2.0 ADN polimerase (sen glicerol)
A ADN polimerase Bst V2 deriva da ADN polimerase I de Bacillus stearothermophilus, que ten actividade de ADN polimerase 5′→3′ e unha forte actividade de substitución da cadea, pero sen actividade exonuclease 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 é ideal para o desprazamento de cadeas, a amplificación isotérmica LAMP (amplificación isotérmica mediada por bucle) e a secuenciación rápida.Bst DNA polimerase V2 é unha versión de inicio en quente baseada na Bst DNA polimerase V2 (HC5005A) obtida mediante tecnoloxía de modificación reversible, que pode inhibir a actividade da ADN polimerase a temperatura ambiente, polo que o sistema de reacción pode funcionar e formularse a temperatura ambiente para evitar -amplificación específica e mellorar a eficiencia da reacción, e esta versión pode ser liofilizada.Ademais, a súa actividade é liberada a altas temperaturas, polo que non é necesario un paso de activación separado.
Compoñentes
| Compoñente | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst ADN polimerase V2 (sen glicerol) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| Buffer 10×HC Bst V2 | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Aplicacións
1.Amplificación isotérmica LAMP
2.Reacción de desprazamento dunha cadea de ADN
3.Alta secuenciación de xenes GC
4.Secuenciación de ADN a nivel de nanogramos.
Condición de almacenamento
Transporte a menos de 0 °C e almacénase a -25 °C ~ -15 °C.
Definición da unidade
Unha unidade defínese como a cantidade de encima que incorpora 25 nmol de dNTP a un material insoluble en ácido en 30 minutos a 65 °C.
Control de calidade
1.Ensaio de pureza de proteínas (SDS-PAGE):A pureza da ADN polimerase Bst V2 determínase ≥99% mediante a análise SDS-PAGE mediante a detección de azul de Coomassie.
2.EndonucleaseActividade:A incubación dunha reacción de 50 μL que conteña un mínimo de 8 U de ADN polimerase Bst V2 con 1 μg de λDNA durante 16 horas a 37 ℃ non produce degradación detectable segundo se determina.
3.Actividade exonuclease:A incubación dunha reacción de 50 μL que conteña un mínimo de 8 U de ADN polimerase Bst V2 con 1 μg de ADN de dixestión λ -Hind Ⅲ durante 16 horas a 37 ℃ non produce degradación detectable segundo se determina.
4.Actividade Nickase:A incubación dunha reacción de 50 μL que conteña un mínimo de 8 U de ADN polimerase Bst V2 con 1 μg de ADN pBR322 durante 16 horas a 37 °C non produce degradación detectable segundo se determina.
5.Actividade RNase:A incubación dunha reacción de 50 μL que conteña un mínimo de 8 U de ADN polimerase Bst V2 con 1,6 μg de ARN MS2 durante 16 horas a 37 °C non produce degradación detectable, segundo se determina.
6.E. coliADN:120 U de ADN polimerase Bst V2 son cribados para detectar a presenza de ADN xenómico de E. coli mediante TaqMan qPCR con cebadores específicos para o locus do ARNr 16S de E. coli.A contaminación do ADN xenómico de E. coli é ≤1 copia.
Reacción da LAMPADA
| Compoñentes | 25μl |
| Buffer 10×HC Bst V2 | 2,5 μl |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μl |
| dNTP (10 mM cada un) | 3,5 μl |
| SYTO™ 16 Verde (25×)a | 1,0 μl |
| Mestura de imprimaciónb | 6 μl |
| Bst ADN polimerase V2 (sen glicerol) (8 U/uL) | 1 μl |
| Modelo | × μl |
| ddH₂O | Ata 25 μL |
Notas:
1) a.SYTOTM 16 Verde (25×): Segundo as necesidades experimentais, pódense utilizar outros colorantes como substitutos;
2) b.Mestura de imprimación: obtida mesturando 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB e outros volumes.
Reacción e condición
1 × HC Bst V2 Buffer, a temperatura de incubación está entre 60 °C e 65 °C.
Inactivación térmica
80 °C, 20 min
