Enzimas UDG/UNG
A UDG (uracilo ADN glicosilase) pode catalizar a hidrólise da ligazón N-glicosídica entre a base de uracilo e a columna vertebral do azucre-fosfato no ADNss e no ADNds.Pode controlar facilmente a contaminación por aerosol e é axeitado para sistemas de bioloxía molecular comúns como PCR, qPCR, RT-qPCR e LAMP.
Especificacións
| Expresión Host | E. coli recombinante con xene de ADN glicosilase de uracilo |
| Peso Molecular | 24. 8kDa |
| Pureza | ≥95 % (SDS-PAGE) |
| Inactivación térmica | 95 ℃, 5~10 min |
| Definición da unidade | Unha unidade (U) defínese como a cantidade de enzima necesaria para catalizar a hidrólise de 1 μg de ADNdD que contén dU en 30 minutos a 25 ℃. |
Almacenamento
O produto debe almacenarse a -25 ℃ ~ -15 ºC durante dous anos.
Instrucións
1.Preparación da mestura de reacción de PCR segundo o seguinte sistema
| Compoñentes | Volume (μl) | Concentración final |
| 10 × Tampón PCR (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/lixiviación) | 1 | 0,2 mmol/lixiviación |
| ADN modelo | X | - |
| Cebador 1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Cebador 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| ADN polimerase Taq (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| ADN glicosilase de uracilo (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μl |
| ddH₂O | Ata 50 | - |
Nota: Segundo os requisitos experimentais, a concentración final de dUTP pódese axustar entre 0,2-0,6 mmol/L e engadirse selectivamente 0,2 mmol/L de dTTP.
2.Procedemento de amplificación
| Paso de ciclo | Temperatura | Tempo | Ciclos |
| Degradación do modelo que contén dU | 25℃ | 10 minutos | 1 |
| Activación UDG, desnaturalización inicial da plantilla | 95 ℃ | 5 ~ 10 min | 1 |
| Desnaturalización | 95 ℃ | 10 seg |
30-35 |
| Recocido | 60℃ | 20 seg | |
| Extensión | 72 ℃ | 30 seg/kb | |
| Ampliación final | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Nota: O tempo de reacción a 25 °C pódese axustar dentro de 5-10 minutos segundo os requisitos experimentais.
Notas
1.UDG está activo na maioría dos buffers de reacción de PCR.
2.As encimas deben almacenarse nun xeo ou nun baño de xeo cando se usan, e deben almacenarse a -20 °C inmediatamente despois do seu uso.
3.Use o EPI necesario, como bata de laboratorio e luvas, para garantir a súa saúde e seguridade.
