Premezcla universal de qPCR SYBR GREEN (azul)

Número de Cat: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (basado en colorantes) é unha solución previa para amplificación de PCR cuantitativa 2x en tempo real caracterizada por unha alta sensibilidade e especificidade, é de cor azul e ten o efecto de rastrexar a adición de mostras.O compoñente central Taq DNA polimerase usa anticorpos quente para inhibir eficazmente a amplificación inespecífica debido ao recocido do cebador durante a preparación da mostra.Ao mesmo tempo, a fórmula engade os factores promotores para mellorar a eficiencia de amplificación da reacción de PCR e igualar a amplificación de xenes con diferentes contidos de GC (30 ~ 70%), de xeito que a PCR cuantitativa pode obter unha boa relación lineal nun amplo contido cuantitativo. rexión.Este produto contén un colorante de referencia pasivo ROX especial, que é aplicable á maioría dos instrumentos de qPCR.Non é necesario axustar a concentración de ROX en diferentes instrumentos.Só é necesario engadir cebadores e modelos para preparar o sistema de reacción para a amplificación.

Compoñentes

Universal Blue qPCR Master Mix

Condicións de almacenamento

O produto envíase con bolsas de xeo e pódese almacenar a -25 ℃ ~ -15 ℃ durante 18 meses.É necesario evitar a irradiación luminosa forte ao almacenar ou preparar o sistema de reacción.

Especificación

Instrucións

1.Sistema de reacción

[Nota]: Mestura ben antes do uso para evitar burbullas excesivas por axitación vigorosa.

a) Concentración do cebador: a concentración final do cebador é de 0,2 μmol/L, e tamén se pode axustar entre 0,1 e 1,0 μmol/L segundo corresponda.

b) Concentración do modelo: se o molde é unha solución stock de ADNc sen diluir, o volume utilizado non debe exceder 1/10 do volume total da reacción qPCR.

c) Dilución do modelo: recoméndase diluír a solución stock de ADNc 5-10 veces.A cantidade óptima de modelo engadido é mellor cando o valor Ct obtido pola amplificación é de 20-30 ciclos.

d) Sistema de reacción: recoméndase utilizar 20μL ou 50μL para garantir a eficacia e repetibilidade da amplificación do xene diana.

e) Preparación do sistema: prepárese no banco súper limpo e use as puntas e os tubos de reacción sen residuos de nuclease;recoméndase utilizar as puntas con cartuchos de filtro.Evitar a contaminación cruzada e a contaminación por aerosois.

2.Programa de reacción

Programa estándar

Programa rápido

[Nota]: o programa rápido é adecuado para a gran maioría dos xenes, e pódense probar programas estándar para xenes de estrutura secundaria complexa individuais.

a) Temperatura e tempo de recocido: axuste segundo a lonxitude do cebador e o xene diana.

b) Adquisición de sinal de fluorescencia (★): Estableza o procedemento experimental segundo os requisitos das instrucións de uso do instrumento.

c) Curva de fusión: o programa predeterminado do instrumento pódese utilizar normalmente.

3. Análise de resultados 

Requiríronse un mínimo de tres réplicas biolóxicas para os experimentos cuantitativos.Despois da reacción, hai que confirmar a curva de amplificación e a curva de fusión.

3.1 Curva de amplificación:

A curva de amplificación estándar ten forma de S.A análise cuantitativa é máis precisa cando o valor Ct cae entre 20 e 30. Se o valor Ct é inferior a 10, é necesario diluír a plantilla e realizar de novo a proba.Cando o valor Ct está entre 30 e 35, é necesario aumentar a concentración do molde ou o volume do sistema de reacción, para mellorar a eficiencia da amplificación e garantir a precisión da análise dos resultados.Cando o valor de Ct é superior a 35, os resultados da proba non poden analizar cuantitativamente a expresión do xene, pero poden usarse para análise cualitativa.

3.2 Curva de fusión:

O único pico da curva de fusión indica que a especificidade da reacción é boa e pódese realizar unha análise cuantitativa;se a curva de fusión mostra picos dobres ou múltiples, non se pode realizar a análise cuantitativa.A curva de fusión mostra picos dobres, e é necesario xulgar se o pico non obxectivo é un dímero de cebador ou unha amplificación non específica mediante electroforese en xel de ADN agarosa.Se se trata dun dímero de cebador, recoméndase reducir a concentración do cebador ou redeseñar os cebadores con alta eficiencia de amplificación.Se se trata dunha amplificación inespecífica, aumente a temperatura de recocido ou redeseñe os cebadores con especificidade.

Notas

Use o EPI necesario, como bata de laboratorio e luvas, para garantir a súa saúde e seguridade!

Este produto é só para uso de investigación!