Ultra Nuclease
UltraNuclease é unha enxeñeira xenética derivada de Serratia marcescens, que é capaz de degradar ADN ou ARN, xa sexa de cadea bicatenaria ou simple, lineal ou circular baixo unha ampla gama de condicións, degrada completamente os ácidos nucleicos en oligonucleótidos 5'-monofosfato cunha lonxitude de 3-5 bases. .Despois da modificación da enxeñaría xenética, o produto foi fermentado, expresado e purificado en Escherichia coli (E. coli), o que reduce a viscosidade do sobrenadante celular e da investigación científica do lisado celular, pero tamén mellora a eficiencia da purificación e a investigación funcional das proteínas.Tamén se pode usar na terapia xénica, purificación de virus, produción de vacinas, industria farmacéutica de proteínas e polisacáridos como reactivo de eliminación de ácidos nucleicos de residuos do hóspede.
Características do produto
| Nº CAS | 9025-65-4 |
| Nº CE | |
| Peso Molecular | 30 kDa |
| Punto isoeléctrico | 6,85 |
| Pureza de proteínas | ≥99 % (SDS-PAGE e SEC-HPLC) |
| Actividade específica | ≥1.1×106U/mg |
| Temperatura óptima | 37°C |
| pH óptimo | 8.0 |
| Actividade protease | negativa |
| Carga biolóxica | <10 CFU/100.000U |
| Proteína residual da célula hóspede | ≤ 10 ppm |
| Heavy metal | ≤ 10 ppm |
| Endotoxina bacteriana | <0,25 EU/1000U |
| Buffer de almacenamento | Tris-HCl 20 mM, pH 8,0, MgCl2 2 mM, 20 mM NaCl, 50% glicerol |
Condicións de almacenamento
Transporte ≤0 °C; -25 ~ -15 °C Almacenamento, validez de 2 anos (evitar a conxelación-descongelación).
Definición da unidade
A cantidade de encima utilizada para cambiar o valor de absorción de △A260 en 1,0 en 30 min a 37 °C, pH 8,0, equivalente a 37 μg de ADN de esperma de salmón dixerido cortando en oligonucleótidos, definiuse como unha unidade activa (U).
Control de calidade
Proteína residual da célula hóspede: Kit ELISA
•Protease Residuos: 250KU/mL UltraNuclease reaccionou co substrato durante 60 min, non se detectou actividade.
•Endotoxina bacteriana: LAL-Test, Pharmacopeia of the People 's Republic of China Volume 4 (2020 Edition) método de proba de límite de xel.Normas Xerais (1143).
•Carga biolóxica: Farmacopea da República Popular Chinesa Volume 4 (edición de 2020) - Xeral
Regras para a proba de esterilidade (1101), PRC National Standard, GB 4789.2-2016.
•Heavy metal:ICP-AES, HJ776-2015.
Operación
A actividade UltraNuclease inhibiuse significativamente cando a concentración de SDS era superior ao 0,1% ou EDTA
a concentración foi superior a 1 mM. O surfactante Triton X-100, Tween 20 e Tween 80 non tiveron ningún efecto sobre a nuclease
propiedades cando a concentración era inferior ao 1,5%.
| Operación | Funcionamento óptimo | Operación válida |
| Temperatura | 37 ℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0- 11.0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mm |
| TDT | 0-100 mm | > 100 mm |
| 2-Mercaptoetanol | 0-100 mm | > 100 mm |
| Ion metálico monovalente (Na+, K+ etc.) | 0-20 mm | 0-200 mm |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mm |
Uso e dosificación
• Eliminar o ácido nucleico esóxeno dos produtos da vacina, reducir o risco de toxicidade residual do ácido nucleico e mellorar a seguridade do produto.
• Reducir a viscosidade do líquido de alimentación causada polo ácido nucleico, acurtar o tempo de procesamento e aumentar o rendemento proteico.
• Eliminar o ácido nucleico que envolveu a partícula (virus, corpo de inclusión, etc.), que é propicio
á liberación e purificación da partícula.
| Tipo Experimental | Produción de proteínas | Virus, vacina | Drogas celulares |
| Número de celas | 1 g de peso húmido celular (resuspendido con 10 ml de tampón) | Fermentación 1L sobrenadante líquido | 1 L de cultura |
| Dosificación mínima | 250U | 100U | 100U |
| Dosificación recomendada | 2500U | 25000U | 5000U |
• O tratamento con nuclease pode mellorar a resolución e recuperación da mostra para a cromatografía en columna, a electroforese e a análise de transferencia.
• Na terapia xénica, elimínase o ácido nucleico para obter virus adenoasociados purificados.
