RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Este produto contén tampón de reacción, mestura de enzimas RT (ADN polimerase Bst e transcriptase inversa resistente á calor), protectores liofilizados e compoñentes de colorante cromoxénico.Para usalo, só tes que usar Buffer, o encima de reacción e o cebador mestúranse e engádense ao molde;engadir un protector liofilizado pode ser directo.Conectouse a un liofilizador e liofilizouse, e só se engadiron os cebadores e os modelos cando se usaban.Este kit proporciona unha detección visual rápida e clara da amplificación, cuxa reacción negativa indícase en vermello e a reacción positiva indícase cun cambio a amarelo.
Compoñente
| Compoñente | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Buffer de amplificación mediado por bucle (con colorante) | 0,96 ml | 4,80 ml × 2 | 9,60 ml × 10 |
| Mestura de enzimas RT | 270 μl | 2,70 ml | 2,70 ml × 10 |
| Protector liofilizado | 0,96 ml × 2 | 9,60 ml × 2 | 9,60 ml × 20 |
Aplicacións
Para amplificación isotérmica de ADN o ARN.
Condicións de almacenamento
Transportado con xeo seco, almacenado a -25 ~ -15 ℃.Evite a conxelación-desconxelación frecuente, o produto ten unha validez de 12 meses.
Protocolo
1.Desconxelar o tampón de reacción que se utilizará a temperatura ambiente.Agitar brevemente ou inverte os tubos varias veces para mesturar ben e, a continuación, centrifugar para recoller o líquido ata o fondo do tubo.
2.Preparación do sistema de reacción.Este reactivo pódese preparar en dous sistemas de reacción, mestura de reacción líquida e mestura de sistema liofilizado.
1) Preparar a mestura de reacción líquida
| Compoñente | Volume |
| Buffer de amplificación mediado por bucle (con colorante) | 10 μl |
| Mestura de enzimas RT | 2,8 μl |
| 10 × mestura de imprimacióna | 5 μl |
| Modelos ADN/ARN b | × μl |
| Auga sen nucleasas | Ata 50 μL |
2) Mix de sistema de liofilización
① Prepara a mestura liofilizada
| Compoñente | Volume |
| Buffer de amplificación mediado por bucle (con colorante) | 10 μl |
| Protector liofilizado | 20 μl |
| Mestura de enzimas RT | 2,8 μl |
| Auga sen nucleasas | Ata 50 μL |
② Liofilización: a mestura preparada foi liofilizada nun sistema de 50 μl
③ Prepare a mestura de reacción
| Compoñente | Volume |
| Mestura liofilizada | 1 peza |
| 10 × mestura de imprimacióna | 5 μl |
| Modelos ADN/ARN b | × μl |
| Auga sen nucleasas | Ata 50 μL |
Notas:
1) a.Mestura 10×Primer: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (soluble en auga) recoméndase para o ácido nucleico templ.
1.Incubar a 65 °C durante 30-45 minutos, que se poden prolongar adecuadamente segundo o cambio de cor Tempo de reacción.
2.Segundo a simple vista, o amarelo foi positivo e o vermello negativo.
Notas
1.O sal pode aparecer no fondo do tubo tampón, vórtexar brevemente ou inverter os tubos varias veces para mesturar ben a temperatura ambiente.
2.A temperatura de reacción pódese optimizar entre 62 ℃ e 68 ℃ segundo o estado dos cebadores.
3.Os reactivos envasados non deben estar expostos ao aire durante moito tempo.
4.A reacción de decoloración vermella e amarela depende do cambio de pH do sistema de reacción, non use a solución de almacenamento de ácido nucleico Tris que contén, recoméndase usar ddH2O ácido nucleico almacenado;
5.O experimento debe estar estandarizado, incluíndo a preparación do sistema de reacción, a liofilización e o procesamento da mostra e o proceso de adición de mostras;
6.Para evitar a contaminación, recoméndase preparar o sistema de reacción nun banco ultralimpo, noutros Engadir modelos á campana de extracción da sala para evitar falsas interferencias positivas.
