Rnase A
A ribonuclease A (RNaseA) é un polipéptido monocatenario que contén 4 enlaces disulfuro cun peso molecular duns 13,7 kDa.A RNase A é unha endoribonuclease que degrada especificamente o ARN monocatenario nos residuos C e U.En concreto, a escisión recoñece o enlace fosfodiéster formado pola 5′-ribosa dun nucleótido e o grupo fosfato na 3′-ribosa do nucleótido de pirimidina adxacente, de modo que os 2,3′-fosfatos cíclicos hidrolízanse ata os 3 correspondentes. ′fosfatos de nucleósidos (por exemplo, pG-pG-pC-pA-pG é escindida pola RNase A para xerar pG-pG-pCp e A-PG).A RNase A é a máis activa na escisión de ARN monocatenario.A concentración de traballo recomendada é de 1-100 μG/mL, compatible con varios sistemas de reacción.A baixa concentración de sal (NaCl 0-100 mM) pode usarse para cortar ARN monocatenario, ARN bicatenario e cadeas de ARN formadas pola hibridación ARN-ADN.Non obstante, a alta concentración de sal (≥0,3 M), a RNase A só escinde especificamente o ARN monocatenario.
A RNase A úsase máis habitualmente para eliminar o ARN durante a preparación do ADN plasmídico ou do ADN xenómico. Se a DNase está activa ou non durante o proceso de preparación pode afectar facilmente a reacción.O método tradicional de ferver nun baño de auga pódese usar para inactivar a actividade da DNase.Este produto non contén DNase e protease e non require tratamento térmico antes do seu uso.Ademais, este produto tamén se pode usar en experimentos de bioloxía molecular, como análise de protección da RNase e análise de secuencias de ARN.
Condicións de almacenamento
O produto pódese almacenar a -25~-15℃, válido durante 2 anos.
Instrucións
Este é un dos métodos comúns para preparar a solución de almacenamento de RNase A.Tamén se pode preparar poroutros métodos segundo os métodos tradicionais do laboratorio ou da literatura de referencia (comodisolución directa en solución 10 mM de Tris-HCl, pH 7,5 o Tris-NaCl)
1. Use acetato de sodio 10 mM (pH 5,2) para preparar 10 mg/ml de solución de almacenamento de RNase A
2. Quentando a 100 ℃ durante 15 min
3. Arrefriar a temperatura ambiente, engadir 1/10 de volume de Tris-HCl 1 M (pH 7,4), axustar o seu pH a 7,4 (paraexemplo, engade 500 ml de solución de almacenamento de RNase 10 g/ml 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Subembalado a -20 ℃ para almacenamento conxelado, que pode ser estable ata 2 anos.
[Notas]: ao ferver a solución de RNaseA en condicións neutras, formarase precipitación de RNase;Ferva a un pH máis baixo, e se hai precipitación pódese observar, que pode ser provocada pola presenza de impurezas proteicas.Se se atopa sedimento despois da ebulición, as impurezas pódense eliminar mediante centrifugación a alta velocidade (13.000 rpm) e, a continuación, subenvasarse para o almacenamento conxelado.
Información do produto
| Sinónimos | ribonuclease I;ribonuclease pancreática;Ribonuclease 3'-pirimidnooligonucleotidohidrolase;Rnase A;Endoribonulcease I |
| Nº CAS | 9001-99-4 |
| Aparición | Polvo liofilizado branco |
| Peso molecular | ~ 13,7 kDa (secuencia de aminoácidos) |
| Valor Ph | 7.6 (intervalo de actividade 6-10) |
| Temperatura axeitada | 60 ℃ (rango de actividade 15-70 ℃) |
| Axente activador | Na2+.K+ |
| Inhibidor | Inhibidor da Rnasa |
| Método de inactivación | Non se pode inactivar por calefacción, recoméndase usar columna de centrífuga |
| Orixe | Bovino |
| Solubilidade | Soluble en auga (10 mg/ml) |
| Perda en seco | ≤5,0 % |
| Actividade enzimática | ≥60 unidades Kunitz/mg |
| Punto isoeléctrico | 9.6 |
Notas
Para a súa seguridade e saúde, use batas de laboratorio e luvas desbotables para operar.
