Inhibidor da Rnasa
O inhibidor da RNase murina é un inhibidor recombinante da RNase murina expresado e purificado a partir de E.coli.Únese á RNase A, B ou C nunha proporción de 1:1 mediante enlaces non covalentes, inhibindo así a actividade dos tres encimas e protexendo o ARN da degradación.Non obstante, non é eficaz contra a RNase 1, a RNase T1, a nuclease S1, a RNase H ou a RNase de Aspergillus.O inhibidor da RNase murina probouse mediante RT-PCR, RT-qPCR e ARNm IVT, e foi compatible con varias transcriptases inversas comerciais, ADN polimerases e ARN polimerases.
En comparación cos inhibidores da RNase humana, o inhibidor da RNase murina non contén dúas cisteínas moi sensibles á oxidación que provoca a inactivación do inhibidor.Iso o fai estable a baixas concentracións de TDT (menos de 1 mM).Esta característica faino axeitado para o seu uso en reaccións nas que altas concentracións de DTT son adversas para a reacción (por exemplo, RT-PCR en tempo real).
Aaplicación
Este produto pódese usar amplamente en calquera experimento onde sexa posible a interferencia da RNase para evitar a degradación do ARN, como:
1.Síntese da primeira cadea de cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, etc.
2.Protexe o ARN da degradación durante a transcrición/tradución in vitro (por exemplo, sistema de replicación viral in vitro).
3.Inhibición da actividade da RNase durante a separación e purificación do ARN.
Condicións de almacenamento
O produto pódese almacenar a -25~- 15 ℃, válido durante 2 anos.
Buffer de almacenamento
KCl 50 mM, HEPES-KOH 20 mM (pH 7,6, 25 ℃), DTT 8 mM e glicerol ao 50%.
Definición da unidade
A cantidade de inhibidor da RNase murina necesaria para inhibir a actividade de 5 ng de ribonuclease A nun 50 % definiuse como unha unidade (U).
Peso molecular da proteína
O peso molecular do inhibidor da RNase murina é de 50 kDa.
Control de calidade
Exonuclease Actividade:
40 U de inhibidor de RNase murino con 1 μg de ADN de dixestión de λ -Hind III a 37 ℃ durante 16 horas non producen degradación como se determina pola electroforese en xel de agarosa.
Actividade das endonucleases:
40 U de inhibidor de RNase murino con 1 μ g λ de ADN a 37 ℃ durante 16 horas non producen degradación como se determina pola electroforese en xel de agarosa.
Nicking Actividade:
40 U de inhibidor da RNase murina con 1 μ g de pBR322 a 37 ℃ durante 16 horas non producen degradación como se determina mediante electroforese en xel de agarosa.
RNase Actividade:
40 U de inhibidor de RNase murino con 1,6 μ g de ARN MS2 durante 4 h a 37 ℃ non producen degradación segundo o determinado pola electroforese en xel de agarosa.
E.ADN coli:
40 U de inhibidor de RNase murino son cribados para detectar a presenza de ADN xenómico de E. coli mediante TaqMan qPCR con cebadores específicos para o locus do ARNr 16S de E. coli.A contaminación do ADN xenómico de E. coli é ≤ 0,1 pg/40 U.
Notes
1.A oscilación violenta ou a axitación levará á inactivación do encima.
2.O rango de temperatura óptimo deste inhibidor foi de 25-55 ℃ e inactivouse a 65 ℃ e máis.
3.As actividades da RNase H, RNase 1 e RNase T1 non foron inhibidas polo inhibidor da RNase murina.
4.A inhibición da actividade da RNase atopouse nun amplo rango de pH (pH 5-9 estaban todos activos), e a actividade máis alta observouse a pH 7-8.
5. Dado que as ribonucleases normalmente manteñen actividade en condicións de desnaturalización, hai que ter coidado de evitar a desnaturalización das moléculas do inhibidor da RNase que se complexaron cunha ribonuclease.Para evitar a liberación de ribonuclease activa, deben evitarse temperaturas superiores a 50 °C e altas concentracións de urea ou outros axentes desnaturalizantes.
