Premestura de sondas multiplex qPCR
Número de Cat: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Based en colorantes) é unha solución previa para a amplificación PCR cuantitativa 2 × en tempo real caracterizada por unha alta sensibilidade e especificidade, que é de cor azul e ten o efecto da adición de mostras.Este produto é un reactivo premesturado 2× Mix que permite ata catro reaccións de PCR cuantitativas fluorescentes nun só pozo de reacción.Este produto contén o método de anticorpos modificados xeneticamente para o encima Taq de inicio en quente, mellorando moito a sensibilidade e a especificidade da amplificación.Ao mesmo tempo, este produto optimizou profundamente o tampón de reaccións múltiples, o que pode mellorar a eficiencia de amplificación da reacción e promover a amplificación eficaz de modelos de baixa concentración.Este produto pódese usar para xenotipado e análise cuantitativa múltiple.
Especificación
| Inicio quente | Arranque en quente incorporado |
| Método de detección | Detección de sonda cebadora |
| Método PCR | qPCR |
| Polimerase | ADN polimerase Taq |
| Tipo de mostra | ADN |
Condicións de almacenamento
O produto envíase con xeo seco e pódese almacenar a -25 ~ -15 ℃ durante 2 anos.
Instrucións
1. ReacciónSistema
| Compoñentes | Volume (μl) | Concentración final |
| 2 × TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Mestura de cebador (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Mestura de sondas (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Colorante de referencia Rox | 0,5 | 1× |
| Modelo ADN/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | ata 25 | - |
Notas:Mestura ben antes do uso para evitar burbullas excesivas por axitación vigorosa.
a.Concentración de cebadores: a mestura de cebadores contén varios pares de cebadores, normalmente cada cebador a unha concentración final de 0,2 μmol/L e tamén se pode axustar entre 0,1 e 0,5 μmol/L segundo corresponda.
b.Concentración da sonda: Probe Mix contén varias sondas con diferentes sinais de fluorescencia, e a concentración de cada sonda pódese axustar entre 50 e 250 nmol/L segundo a situación específica.
1.Referencia de colorante Rox: úsase en instrumentos de amplificación de PCR en tempo real como Applied Biosystems para corrixir o erro do sinal de fluorescencia xerado entre os pozos;este produto non contén referencia de tintura Rox.Recoméndase Cas#10200 se é necesario.
2.Dilución do modelo: a qPCR é moi sensible e recoméndase diluír o modelo para o seu uso.Se o modelo é unha solución stock de ADNc, o volume do modelo non debe exceder 1/10 do volume total.
3.Sistema de reacción: recoméndase 25 μL, 30 μL ou 50 μL para garantir a eficacia e repetibilidade da amplificación do xene diana.
4.Preparación do sistema: prepárese no banco súper limpo e use as puntas e os tubos de reacción sen residuos de nuclease;recoméndase utilizar as puntas con cartuchos de filtro.Evitar a contaminación cruzada e a contaminación por aerosois.
2.Programa de reacción
| Paso de ciclo | Temp. | Tempo | Ciclos |
| Inicial-desnaturalización | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Desnaturalización | 95 ℃ | 15 seg | 45 |
| Recocido/Extensión | 60 ℃ | 30 seg |
Notas:
1.Recocido/Extensión: a temperatura e o tempo pódense axustar adecuadamente segundo o valor Tm de imprimación deseñado.
2.Adquisición de sinal de fluorescencia: o tempo de adquisición de sinal de fluorescencia necesario para os distintos instrumentos de detección de qPCR é diferente, por favor, estableza segundo o límite de tempo mínimo.O tempo de varios instrumentos comúns establécese do seguinte xeito:
20 segundos: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 seg: Applied Biosystems 7300
32 seg: Applied Biosystems 7500
Notas
Use o EPI necesario, como bata de laboratorio e luvas, para garantir a súa saúde e seguridade.
