Kit de xenotipado do rato

Número de Cat: HCR2021A

Este produto é un kit deseñado para a identificación rápida de xenotipos de ratos, incluíndo a extracción de ADN en bruto e o sistema de amplificación por PCR.O produto pódese usar para a amplificación por PCR directamente desde a cola do rato, a orella, os dedos do pé e outros tecidos despois dunha simple escisión por Lysis Buffer e Proteinase k.Sen dixestión nocturna, extracción con fenol-cloroformo ou purificación en columna, o que é sinxelo e acurta o tempo dos experimentos.O produto é adecuado para a amplificación de fragmentos diana de ata 2 kb e reaccións de PCR multiplex con ata 3 pares de cebadores.O 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix contén ADN polimerase xeneticamente modificada, Mg²⁺, dNTPs e un sistema tampón optimizado para proporcionar unha alta eficiencia de amplificación e tolerancia aos inhibidores, de xeito que as reaccións de PCR se poden levar a cabo engadindo molde e cebadores e rehidratando o produto a 1×.O produto de PCR amplificado con este produto ten unha base "A" prominente no extremo 3′ e pódese usar directamente para a clonación de TA despois da purificación.

Compoñentes

Condicións de almacenamento

Os produtos deben almacenarse a -25 ~ -15 ℃ durante 2 anos.Despois da desconxelación, o tampón de lisis pódese almacenar a 2 ~ 8 ℃ para un uso múltiple a curto prazo e mestura ben cando se usa.

Aplicación

Este produto é axeitado para a análise de eliminación de ratos, detección de transxénicos, xenotipado, etc.

características

1.Operación sinxela: non é necesario extraer ADN xenómico;

2.Ampla aplicación: axeitado para a amplificación directa de varios tecidos de rato.

Instrucións

1.Liberación de ADN xenómico

1) Preparación do lisado

O lisado de tecidos prepárase segundo o número de mostras de rato que se van lisar (o lisado de tecidos debe prepararse no lugar segundo a dosificación e mesturarse completamente para o seu uso), e a proporción de reactivos necesarios para unha única mostra é a seguinte:

2) Preparación e lise da mostra

Uso recomendado de tecidos

Tome unha cantidade axeitada de mostras de tecido de rato en tubos de centrífuga limpos, engade 200 μL de lisado de tecido fresco a cada tubo de centrífuga, vórtice e axite, incube a 55 ℃ durante 30 minutos e quenta a 98 ℃ durante 3 minutos.

3) Centrifugación

Agite ben o lisado e centrifugue a 12.000 rpm durante 5 minutos.O sobrenadante pódese usar como molde para a amplificación por PCR.Se o modelo é necesario para o almacenamento, transfira o sobrenadante a outro tubo de centrífuga estéril e gárdao a -20 ℃ durante 2 semanas.

2.Amplificación por PCR

Retire a mestura de PCR directa de tecidos de rato 2 × de -20 ℃ e desconxele en xeo, mestura boca abaixo e prepare o sistema de reacción de PCR segundo a seguinte táboa (operar con xeo):

Nota:

a) A cantidade engadida non debe exceder 1/10 do sistema e, se se engade demasiado, a amplificación por PCR pode inhibirse.

Condicións PCR recomendadas

Nota:

a) Temperatura de recocido: en referencia ao valor Tm do cebador, recoméndase establecer a temperatura de recocido ao valor de Tm menor do cebador +3~5℃.

Problemas e solucións comúns

1.Sen tiras dirixidas

1) Produto de lise excesivo.Escolla a cantidade máis adecuada de modelo, normalmente non máis de 1/10 do sistema;

2) Tamaño da mostra demasiado grande.Diluír o lisado 10 veces e despois amplificar, ou reducir o tamaño da mostra e volver a lise;

3) As mostras de tecido non son frescas.Recoméndase usar mostras de tecido fresco;

4) Mala calidade da imprimación.Use ADN xenómico para a amplificación para verificar a calidade do cebador e optimizar o deseño do cebador.

2.Amplificación inespecífica

1) A temperatura de recocido é demasiado baixa e o número de ciclos é demasiado alto.Aumentar a temperatura de recocido e reducir o número de ciclos;

2) A concentración do modelo é demasiado alta.Reducir a cantidade de molde ou diluír o modelo 10 veces despois da amplificación;

3) Escasa especificidade do cebador.Optimizar o deseño da imprimación.

Notas

1.Para evitar a contaminación cruzada entre as mostras, débense preparar varias ferramentas de mostraxe, e a superficie das ferramentas pódese limpar cunha solución de hipoclorito sódico ao 2% ou un limpador de ácidos nucleicos despois de cada toma de mostras se é necesario un uso repetido.

2.Recoméndase utilizar tecidos de rato frescos e o volume de mostraxe non debe ser demasiado grande para non afectar os resultados da amplificación.

3.Lysis Buffer debe evitar a conxelación-desconxelación frecuente e pódese almacenar a 2 ~ 8 ℃ para uso múltiple a curto prazo.Se se almacena a baixa temperatura, pode producirse precipitación e debe disolverse completamente antes do uso.

4.A mestura de PCR debe evitar a conxelación-desconxelación frecuente e pódese almacenar a 4 ℃ para un uso repetido a curto prazo.

5.Este produto é só para investigación experimental científica e non debe usarse en diagnóstico ou tratamento clínico.