ADN polimerase Bst 2.0 (sen glicerol, de alta densidade)
A ADN polimerase Bst V2 deriva da ADN polimerase I de Bacillus stearothermophilus, que ten actividade de ADN polimerase 5′→3′ e unha forte actividade de substitución da cadea, pero sen actividade exonuclease 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 é ideal para o desprazamento de cadeas, a amplificación isotérmica LAMP (amplificación isotérmica mediada por bucle) e a secuenciación rápida.Esta ADN polimerase Bst V2 é capaz de inhibir a actividade da ADN polimerase a temperatura ambiente, de xeito que pode ser operada e o sistema de reacción pode formularse a temperatura ambiente, evitando a amplificación inespecífica e mellorando a eficiencia da reacción, e esta versión pode estar liofilizado.Ademais, é capaz de liberar a súa actividade a temperaturas elevadas, eliminando así a necesidade dun paso de activación separado.
Compoñentes
| Compoñente | HC5007A-01 | HC5007A-02 | HC5007A-03 |
| Bst ADN polimerase V2 (sen glicerol) (32U/μL) | 0,05 ml | 0,25 ml | 2,5 ml |
| Buffer 10×HC Bst V2 | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Aplicacións
1.Amplificación isotérmica LAMP
2.Reacción de desprazamento dunha cadea de ADN
3.Alta secuenciación de xenes GC
4.Secuenciación de ADN a nivel de nanogramos.
Condición de almacenamento
Transporte a menos de 0 °C e almacénase a -25 °C ~ -15 °C.
Definición da unidade
Unha unidade defínese como a cantidade de encima que incorpora 25 nmol de dNTP a un material insoluble en ácido en 30 minutos a 65 °C.
Reacción da LAMPADA
| Compoñentes | 25 μlSistema |
| Buffer 10×HC Bst V2 | 2,5 μl |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μl |
| dNTP (10 mM cada un) | 3,5 μl |
| SYTO™ 16 Verde (25×)a | 1,0 μl |
| Mestura de imprimaciónb | 6 μl |
| Bst ADN polimerase V2 (sen glicerol) (32 U/uL) | 0,25 μl |
| Modelo | × μl |
| ddH₂O | Ata 25 μL |
Notas:
1) a.SYTOTM 16 Verde (25×): Segundo as necesidades experimentais, pódense utilizar outros colorantes como substitutos;
2) b.Mestura de cebadores: obtida mesturando 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB e outros volumes.
Reacción e condición
1 × HC Bst V2 Buffer, a temperatura de incubación está entre 60 °C e 65 °C.
Inactivación térmica
80 °C, 20 min.
