Fosfatase alcalina (ALP)
Descrición
A fosfatase alcalina deriva dunha cepa recombinante de E. coli que porta o xene TAB5.O encima cataliza a desfosforilación dos extremos 5´ e 3´ dos fosfomonoésteres de ADN e ARN.Ademais, hidroliza a ribosa, así como os desoxirribonucleósidos trifosfatos (NTPs e dNTPs).A fosfatasa alcalina TAB5 actúa nos extremos saíntes de 5', rebaixados 5' e romos.A fosfatase pode usarse en moitas aplicacións de bioloxía molecular, como a clonación ou o etiquetado dos extremos da sonda para eliminar os extremos fosforilados do ADN ou do ARN.Nos experimentos de clonación, a desfosforilación impide que o ADN plasmídico linealizado se autoliga.Tamén pode degradar os dNTP non incorporados nas reaccións de PCR para preparar un molde para a secuenciación do ADN.A enzima inactiva de forma completa e irreversible quentando a 70 °C durante 5 minutos, polo que non é necesaria a eliminación da fosfatase antes da ligadura ou do etiquetado final.
Uso
1. A fosfatase alcalina acoplada a proteínas (anticorpos, estreptavidina, etc.) pode identificar específicamente moléculas diana, e pódese usar en ELISA, WB e detección histoquímica;
2.Pódese usar fosfatase alcalina para desfosforizar o 5'-terminal do ADN ou do ARN para evitar a autoenlace;
3.O ADN ou ARN desfosforilado anterior pódese marcar mediante fosfatos radiomarcados (a través da polinucleótido quinase T4)
Estrutura Química
Especificación
| Elementos de proba | Especificacións |
| Actividade enzimática | 5U/μL |
| Actividade das endonucleases | Non detectado |
| Actividade Exonuclease | Non detectado |
| Actividade de Nicking | Non detectado |
| Actividade RNase | Non detectado |
| ADN de E.coli | ≤1 copia/5U |
| Endotoxina | Proba LAL, ≤10EU/mg |
| Pureza | ≥95 % |
Transporte e almacenamento
Transporte:Ambiente
Almacenamento:Almacenar a 2-8 °C
Re-proba recomendadaVida:2 anos
