DNase I
A DNase I (desoxirribonuclease I) é unha endodesoxirribonuclease que pode dixerir ADN monocatenario ou bicatenario.Recoñece e escinde enlaces fosfodiéster para producir monodesoxinucleótidos ou oligodesoxinucleótidos monocatenarios ou bicatenarios con grupos fosfato no 5′-terminal e hidroxilo no 3′-terminal.A actividade da DNase I depende do Ca2+ e pode ser activada por ións metálicos divalentes como Mn2+ e Zn2+.5 mM Ca2+ protexe o encima da hidrólise.En presenza de Mg2+, o encima podería recoñecer e escindir aleatoriamente calquera sitio de calquera febra de ADN.En presenza de Mn2+, as dobres cadeas de ADN pódense recoñecer e escindir simultáneamente case no mesmo sitio para formar fragmentos de ADN de extremo plano ou fragmentos de ADN de extremo pegajoso con 1-2 nucleótidos que sobresaen.
Propiedade do produto
A DNase I do páncreas bovino expresouse no sistema de expresión de lévedos e purificouse.
Copoñentes
| Compoñente | Volume | |||
| 0,1 KU | 1KU | 5KU | 50 KU | |
| DNase I, libre de RNase | 20 μl | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| 10 × ADNase I tampón | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Transporte e almacenamento
1. Estabilidade de almacenamento: - 15 ℃ ~ -25 ℃ para o almacenamento;
2.Estabilidade do transporte: transporte baixo bolsas de xeo;
3. Subministrado en: Tris-HCl 10 mM, CaCl 2 mM2, 50% de glicerol, pH 7,6 a 25 ℃ .
Definición da unidade
Unha unidade defínese como a cantidade de encima que degradará completamente 1 µg de ADN pBR322 en 10 minutos a 37 °C.
Control de calidade
RNase:5U de DNase I con 1,6 μg de ARN MS2 durante 4 horas a 37 ℃ non producen degradación como se determina pola electroforese en xel de agarosa.
Bacteriano Endotoxina:Proba LAL, segundo a edición 2020 da Farmacopea chinesa IV, método de proba de límite de xel, regra xeral (1143).O contido de endotoxinas bacterianas debe ser ≤10 EU/mg.
Instrucións de uso
1.Prepare a solución de reacción no tubo sen RNase segundo as proporcións que se indican a continuación:
| Compoñente | Volume |
| ARN | X μg |
| 10 × DNase I tampón | 1 μl |
| ADNase I, libre de RNase (5U/μL) | 1 U por μg de ARN |
| ddH2O | Ata 10 μL |
2,37 ℃ durante 15 minutos;
3.Engade o tampón de terminación para deter a reacción e quéntase a 65 ℃ durante 10 minutos para inactivar a DNase I. A mostra pódese usar directamente para o seguinte experimento de transcrición.
Notas
1.Use 1U DNase I por μg de ARN ou 1U DNase I para menos de 1μg de ARN.
2.O EDTA debe engadirse a unha concentración final de 5 mM para protexer o ARN de ser degradado durante a inactivación do encima.
