Kit de ELISA CHO HCP

Neste ensaio utilízase un método de ELISA inmunoabsorbente dun paso.As mostras que conteñen CHOK1 HCP reaccionan simultáneamente con anticorpos anti-CHOK1 de cabra marcados con HRP e anticorpos anti-CHOK1 revestidos na placa ELISA, formando finalmente un complexo sándwich de anticorpos marcados con anticorpos de fase sólida con HCP.O antíxeno-anticorpo non unido pódese eliminar lavando a placa ELISA.O substrato de TMB engádese ao pozo para unha reacción suficiente.O desenvolvemento da cor é detido despois de engadir a solución de parada, e o valor de DO ou absorbancia da solución de reacción a 450/650 nm é lido cun lector de microplacas.O valor de DO ou valor de absorbancia é proporcional ao contido de HCP na solución.A partir diso, a concentración de HCP na solución pódese calcular segundo a curva estándar.

Aplicación

Este kit úsase para detectar cuantitativamente o contido de residuos de proteína da célula hóspede CHOK1 nas mostras.

Copoñentes

Equipo necesario

Almacenamento e estabilidade

1.Transporte a -25~-15°C.

2.As condicións de almacenamento son as que se indican na Táboa 1;os compoñentes 1-2 almacénanse ≤–20 °C, 5-6 almacénanse RT, 3、4、7、8 almacénanse a 2-8℃;o período de validez é de 12 meses.

Parámetros do produto

1.Sensibilidade: 1 ng/ml

2.Rango de detección: 3-100 ng/ml

3.Precisión: CV intraensaio ≤ 10 %, CV interensaio ≤ 15 %

4.Cobertura de HCP: >80%

5.Especificidade: este kit é universal xa que reacciona especificamente con CHOK1 HCP independentemente do proceso de purificación.

Preparación de reactivos

1.PBST 0,05 %

Tome 15 ml de 20×PBST 0,05%, diluído en ddH₂O, e fixo ata 300 ml.

2.1,0% BSA

Tome 1 g de BSA da botella e dilúa en 100 ml de PBST 0,05%, mestura ben ata que se disolva completamente e almacénase a 2-8 °C.O tampón de dilución preparado é válido durante 7 días.Recoméndase preparar segundo sexa necesario.

3.Solución de detección 2 μg/ml

Tome 48 μL de 0,5 mg/mL de Anti-CHO HCP-HRP e dilúa en 11.952 μL de BSA ao 1 % para obter unha concentración final de solución de detección de 2 μg/mL.

4.QC e preparación de estándares CHOK1 HCP

Táboa: Elaboración de QC e Estándares 

Procedemento de ensaio

1.Prepare os reactivos como se indica en "Preparación de reactivos" anterior.

2.Tome 50 μL de patróns, mostras e QC (consulte a Táboa 3) en cada pozo, despois engade 100 μL de solución de detección (2 μg/mL);Cubra a placa con selado e coloque a placa ELISA na termomezcladora.Incubar a 500 rpm, 25 ± 3 ℃ durante 2 horas.

3.Inverte a microplaca na pía e descarta a solución de revestimento.Pipetear 300 μL de PBST 0,05% en cada pozo para lavar a placa ELISA e descartar a solución, e repetir o lavado 3 veces.Inverte o prato sobre unha toalla de papel limpa e seca.

4.Engade 100 μl de substrato de TMB (consulta a táboa 1) a cada pozo, sela a placa ELISA e incuba na escuridade a 25 ± 3 ℃ durante 15 min.

5.Pipetear 100 μL de solución de parada en cada pozo.

6.Mida a absorbancia a unha lonxitude de onda de 450/650 nm cun lector de microplacas.

7.Analiza datos mediante SoftMax ou software equivalente.Trace a curva estándar utilizando un modelo de regresión loxística de catro parámetros.

Exemplo de curva estándar

NOTA: Se a concentración de HCP na mostra supera o límite superior da curva estándar, debe diluirse adecuadamente co tampón de dilución antes da proba.

NOTAS

A solución de parada é ácido sulfúrico 2M, tómese con coidado para evitar salpicaduras.